تلوين غرام: كيف يكشف البكتيريا وما معنى نتائجه؟

هو أسلوب تلوين مخبري تُعالَج فيه عينة مثبتة على شريحة زجاجية بأصباغ ومواد متتابعة، ثم تُفحص بالمجهر. يكشف الفحص لون البكتيريا وشكلها وترتيبها، مثل وجود كرات متجمعة أو عصيات منفردة. وقد يُظهر أيضًا خلايا دم بيضاء تدعم وجود التهاب، دون أن تحدد سببه وحدها.

يُطلب الفحص عند الاشتباه بعدوى بكتيرية في مواضع مختلفة، خصوصًا عندما تكون معرفة أولية سريعة مفيدة لتوجيه العلاج. وتختلف قيمته بحسب نوع العينة؛ فرؤية بكتيريا في سائل يفترض أن يكون معقمًا تحمل دلالة مختلفة عن رؤيتها في عينة من الفم أو الجلد، حيث تعيش بكتيريا طبيعية.

البكتيريا موجبة الغرام

تملك عادةً طبقة سميكة من مادة الببتيدوغليكان في جدارها الخلوي، ما يساعدها على الاحتفاظ بمعقّد الصبغة الأساسية أثناء إزالة اللون. لذلك تبدو بنفسجية أو زرقاء داكنة. ومن أمثلتها المكورات العنقودية والمكورات العقدية، لكن اللون وحده لا يميّز أنواعها ولا يثبت أنها سبب الأعراض.

البكتيريا سالبة الغرام

لديها طبقة أرق من الببتيدوغليكان وغشاء خارجي إضافي. تفقد الصبغة الأساسية خلال مرحلة إزالة اللون، ثم تلتقط الصبغة المعاكسة فتظهر وردية أو حمراء. وتشمل أمثلتها الإشريكية القولونية وأنواعًا من الكليبسيلا والنيسرية. ولا يعني هذا التصنيف أن إحدى المجموعتين أخطر دائمًا؛ فالخطورة تعتمد على نوع الجرثومة وموضع العدوى وحالة المريض.

يختار الطبيب العينة وفق موضع العدوى المحتمل. ومن العينات التي قد تُفحص بصبغة غرام:

• البلغم عند تقييم بعض التهابات الجهاز التنفسي السفلي.
• القيح أو عينات من الجروح والخراجات، وقد تكون العينة العميقة أنسب من المسحة السطحية.
• سوائل الجسم، مثل السائل النخاعي أو سائل المفصل عند وجود داعٍ طبي.
• عينات بول أو إفرازات تناسلية في حالات محددة، وليس بالضرورة ضمن كل فحص روتيني.
• عينات من زجاجات مزرعة الدم بعد ظهور نمو ميكروبي فيها.

لا تعطي جميع العينات الدقة نفسها. فاللعاب بدل البلغم، أو تلوث العينة ببكتيريا الجلد، أو تأخر نقلها قد يجعل تفسير النتيجة أصعب. ولهذا قد يطلب المختبر إعادة جمع العينة إذا لم تكن مناسبة للفحص.

لا يحتاج تلوين غرام نفسه إلى صيام عادةً، لكن التحضير يعتمد على إجراء جمع العينة. اتبع تعليمات الطبيب أو المختبر، وأخبرهما بالمضادات الحيوية التي تستخدمها؛ لأنها قد تقلل عدد البكتيريا المرئية أو تؤثر في الفحوص المكملة. لا توقف دواءً موصوفًا من تلقاء نفسك.

يُفضّل جمع العينات قبل بدء المضاد الحيوي عندما يكون ذلك ممكنًا وآمنًا، لكن لا يجوز تأخير العلاج العاجل في الحالات الخطيرة. وإذا طُلبت عينة بلغم، فالمقصود إفرازات تخرج بالسعال من الصدر، لا اللعاب فقط. أما أخذ سائل من المفصل أو السائل النخاعي فيحتاج إلى إجراء طبي وتعليمات خاصة.

يجهّز المختص طبقة رقيقة من العينة على شريحة، ويتركها لتجف ثم يثبتها بالطريقة المناسبة. وبعد ذلك تمر الشريحة بمراحل أساسية متتابعة:

• التلوين الأولي: تُضاف صبغة الكريستال البنفسجي لتلوين الخلايا البكتيرية.
• إضافة اليود: يساعد اليود على تكوين معقّد مع الصبغة داخل الخلايا.
• إزالة التلوين: تُستخدم مادة مخصصة، مثل الكحول أو خليط مناسب، لتمييز استجابة الجدران البكتيرية.
• التلوين المعاكس: تُضاف صبغة مثل السافرانين لتلوين البكتيريا التي فقدت اللون الأساسي.
• الفحص المجهري: تُقيّم الألوان والأشكال وترتيب البكتيريا والخلايا الأخرى الموجودة.

تتطلب الخطوات ضبطًا دقيقًا؛ فالإفراط في إزالة اللون أو عدم كفايتها قد يغيّر المظهر. كما أن سماكة العينة وحالة البكتيريا تؤثران في جودة القراءة. وهذه تقنية مختبرية، وليست اختبارًا منزليًا يمكن الاعتماد عليه.

قد يذكر التقرير «مكورات موجبة الغرام في عناقيد» أو «عصيات سالبة الغرام». هذه أوصاف توجه المختص إلى احتمالات معينة، لكنها لا تكفي لتسمية الجرثومة بثقة في معظم الحالات. وقد يذكر التقرير أيضًا كمية البكتيريا ووجود خلايا التهابية أو خلايا طلائية تساعد على تقييم جودة العينة.

وجود أكثر من شكل بكتيري قد يعكس عدوى مختلطة، أو بكتيريا طبيعية من موضع الجمع، أو تلوثًا أثناء أخذ العينة. ويُفصل بين هذه الاحتمالات بالربط مع الأعراض والفحص السريري والمزرعة، وليس بمجرد عدد الألوان الظاهرة.

أما عبارة «لم تُشاهد بكتيريا» فلا تستبعد العدوى. فقد تكون أعداد الجراثيم قليلة، أو تكون العينة غير ممثلة للموضع المصاب، أو تكون البكتيريا قد تأثرت بالعلاج. كذلك لا تظهر بعض الميكروبات بهذه الطريقة بصورة موثوقة.

تلوين غرام سريع نسبيًا، وقد تصدر نتيجته خلال ساعات من وصول العينة بحسب نظام المختبر. لكنه لا يكشف الفيروسات، ولا يُستخدم وحده لنفي الفطريات أو الطفيليات. ويمكن رؤية بعض الخمائر به، إلا أن تحديدها قد يتطلب اختبارات إضافية.

بعض البكتيريا تحتاج إلى وسائل مختلفة؛ فالمتفطرات المسببة للسل تُفحص بصبغات خاصة أو اختبارات جزيئية، والميكوبلازما لا تمتلك جدارًا خلويًا تقليديًا، لذلك لا يصنفها هذا الفحص بالطريقة المعتادة. وقد تبدو بعض الجراثيم متغيرة التلوّن لأسباب تتعلق بنوعها أو بحالة العينة.

• المزرعة: تساعد على تنمية الميكروب والتعرف إليه عندما يكون قابلًا للنمو بالطرق المستخدمة.
• اختبار الحساسية: يقيّم استجابة الجرثومة لمضادات حيوية مختلفة، ولا يمكن استنتاج نتيجته من لونها وحده.
• الفحوص الجزيئية: تكشف المادة الوراثية لميكروبات محددة، وقد تكون أنسب في بعض الحالات.

قد تساعد النتيجة الأولية الطبيب على اختيار علاج مبدئي أو تعديله، خاصةً في العدوى الشديدة. لكن القرار يعتمد أيضًا على موضع العدوى، وشدتها، والحساسية الدوائية، ووظائف الأعضاء، وأنماط المقاومة المحلية. ثم يُراجع العلاج عند ظهور نتائج التعرف إلى الميكروب والحساسية. لا تبدأ مضادًا حيويًا اعتمادًا على عبارة «موجب» أو «سالب الغرام» فقط.

راجع الطبيب لتفسير النتيجة إذا استمرت الحمى، أو زاد الألم والتورم، أو خرج قيح من جرح، أو استمرت أعراض البول أو التنفس. وتحتاج النتيجة إلى تقييم أسرع عند ضعف المناعة أو بعد جراحة حديثة، بحسب الأعراض وموضع العينة.

اطلب رعاية عاجلة عند وجود صعوبة تنفس، أو ارتباك، أو تدهور سريع، أو صداع شديد مع حمى وتيبس الرقبة، أو مفصل متورم شديد الألم مع حمى. لا تنتظر نتيجة الصبغة أو المزرعة في هذه الحالات. الفحص أداة مساعدة، ولا يغني عن التقييم الطبي عند وجود علامات عدوى خطيرة.